Dzīvo un elpo kā Ezio, leģendārais slepkava meistars, savā ilgstošajā cīņā pret spēcīgo Templiešu ordeni. Viņam jādodas uz Itālijas lielāko pilsētu Romu, varas, alkatības un korupcijas centru, lai uzbruktu ienaidnieka sirdī. Lai uzvarētu tur iesakņojušos korumpētos tirānus, būs nepieciešams ne tikai spēks, bet arī vadība, jo Ezio komandē visu brālību, kas pulcēsies viņa pusē. Tikai strādājot kopā, slepkavas var sakaut savus mirstīgos ienaidniekus un novērst viņu ordeņa izzušanu. Un pirmo reizi tiek ieviests vēl neredzēts vairāku spēlētāju slānis, kas ļauj izvēlēties no plašā Assassin varoņu klāsta, katrs ar saviem unikālajiem ieročiem un slepkavības paņēmieniem, un saskaņot savas prasmes ar citiem Assassins no visas pasaules. Ir pienācis laiks pievienoties Brālībai.
