Dzīvo un elpo kā Ezio, leģendārais meistars slepkava, viņa ilgstošajā cīņā pret vareno Templiešu ordeni. Viņam jādodas uz Itālijas lielāko pilsētu Romu, varas, alkatības un korupcijas centru, lai iedarbotos uz ienaidnieka sirdi. Lai sakautu tur iesakņojušos korumpētos tirānus, būs nepieciešams ne tikai spēks, bet arī līderība, jo Ezio komandē visu Brālību, kas apvienosies viņa pusē. Tikai strādājot kopā, slepkavas var uzvarēt savus mirstīgos ienaidniekus un novērst sava Ordeņa izzušanu. Un pirmo reizi tiek ieviests vēl nekad neredzēts vairāku spēlētāju režīms, kas ļauj izvēlēties no plaša slepkavu varoņu klāsta, katram ar saviem unikāliem ieročiem un slepkavības tehnikām, un salīdzināt savas prasmes ar citiem slepkavām no visas pasaules. Ir pienācis laiks pievienoties Brālībai.
